卡梅德生物科技（天津）有限公司
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卡梅德生物致力于羊駝VHH抗體的產生已有9年多的時間，并擁有一支經驗豐富的技術團隊。據我們的實驗項目數據統計，每年都有數百個羊駝VHH抗體構建服務成功交付?？返律锝⒘艘粋€完善的、成熟的噬菌體抗體展示技術平臺?；谑删w展示技術平臺，卡梅德生物可以提供包括抗原設計、羊駝免疫、文庫構建與篩選、活性功能驗證等主要實驗環節，并為全球的科學家提供高特異性和高親和力的羊駝VHH抗體。
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羊駝VHH抗體庫構建背景：
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羊駝是駱駝科的成員，包括美洲駝（Llama）以及我們熟悉的羊駝（Alpaca）。除常規IgG外，駝科動物還產生一種功能性單鏈抗體，該抗體能夠與抗原結合，有時稱為VHH抗體。這些抗體僅由重鏈組成，缺乏輕鏈和功能性CH1和CH4結構域。這些所謂的重鏈抗體正被用于開發單域抗體。這些抗體的單結構域性質提供了獨特的優勢，使其在生物技術應用中脫穎而出。
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圖1羊駝抗體肽結構域示意圖
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VHH抗體的優點：（1）在高溫和pH下的穩定性；（2） VHH可以識別通常不被常規抗體識別的抗原位點；（3）它們的小分子片段有助于快速組織滲透和標記應用，包括跨越血腦屏障；（4）用于大規模生產節約成本的替代品。
卡梅德生物使用M13噬菌體的pIII蛋白進行VHH抗體（納米抗體）表面展示。我們的科學家構建了帶有Flag和6×His標簽雙標簽的噬菌體載體，并制備了具有108轉染效率的TG1和XL1 Blue宿主細胞，經過2-3次轉染和擴增，可以為客戶提供高質量的VHH抗體展示文庫，其足夠的庫容量為108-109，包裝容量為1013-1016/ml。通過抗原限制壓力篩選多輪納米抗體文庫，可獲得多達20-30株高親和力噬菌體菌株。最后通過簡單的IPTG誘導，可以在1-2周內獲得大量抗體表達產物，以滿足客戶的研究需求，例如FACS和細胞活性測試。
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制備流程：
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服務內容：
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步驟 |
服務內容 |
周期 |
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羊駝免疫 |
* 一只健康的成年羊駝（28-36月大）免疫5-7次
* ELISA效價測定
* 抗血清采集 |
8-10周 |
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cDNA制備（客戶可以提供細胞） |
* 總RNA提取
* 高保真RT-PCR制備cDNA |
1個工作日 |
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VHH抗體庫構建 |
* 引物設計與合成
* 以cDNA為模板，PCR擴增重鏈抗體基因可變區
* 噬粒構建與轉化：酶切、連接噬菌粒載體，電擊轉化TG1宿主菌，構建抗體庫
* 鑒定：隨機挑選20-50個克隆，PCR鑒定、測序、分析抗體序列 ? |
3-4周 |
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VHH抗體庫篩選（3輪） |
* 抗原極限施壓法進行3輪篩選
* 鑒定：隨機挑選96個克隆，ELISA效價測定
* 10-15個陽性克隆表達制備VHH抗體上清 |
4-5周 |
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交付：
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--VHH抗體庫2ml，>1?1013/ml噬菌體顆粒，有效庫容量>108
--表達10-15個陽性克隆以制備VHH抗體上清液
--實驗報告：實驗步驟和序列測定信息和比對結果
--原始數據：可根據客戶要求提供我完整實驗記錄原始數據
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駱駝與羊駝VHH抗體文庫對比：
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比較項目 |
羊駝VHH抗體文庫 |
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抗原耐受量 |
高，多種抗原混合，高劑量免疫 |
較高，多種抗原混合中等免疫劑量 |
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抗血清滴度 |
高 |
高 |
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中和抗體效價 |
高 |
較高 |
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抗體親和力 |
更容易獲得高親和力抗體 |
能夠獲得高親和力抗體 |
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抗原需求量 |
4-6mg，純度>85% |
2-3mg，純度>85% |
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采血量 |
一次可采血200ml |
一次80-100ml血液 |
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PBMC細胞量 |
高 |
一般 |
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有效庫容 |
高，免疫庫108-109 |
高，免疫庫107-108 |
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動物成本 |
較低 |
高 |
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小分子抗原反應性 |
高 |
一般 |
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服務優勢：
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--提供免疫庫構建服務和天然羊駝抗體庫篩選服務
--約16-19周可獲得周期短、質量高的文庫和單克隆抗體細胞系
--高庫容量：足夠的庫容量108-109/免疫庫
--高親和力抗體構建
--個性化方案分析和定制
--完整的文件追溯提和QC質量控制文件
如何訂購？
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