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卡梅德生物(KMD?Bioscience)多年來致力于各類親和力測定研究,能夠提供無標簽分子互作研究:包括蛋白質-蛋白質的親和力檢測;抗體抗原親和力檢測;蛋白質與小分子藥物親和力檢測;蛋白質-DNA親和力檢測等?;贐iacore平臺,卡梅德生物還能夠根據客戶的需要,提供準確、快速的含受體的低分子量化合物和許多其他化合物的親和力檢測以及高通量親和力排序服務。
表面等離子體共振(Surface Plasmon Resonance, SPR)技術是一種基于光學的無標記檢測技術,通過傳感器芯片跟蹤信號變化實時檢測兩個或多個分子之間相互作用,SPR信號通過折射率變化呈現。SPR親和力測定具有高通量、高靈活性、高靈敏度的特點,可以用于早期的藥物研發以及臨床前藥物篩選。比如:篩選小分子藥物或多肽(酶或抗體等)具有強大的優勢能夠快速、準確地篩選出候選藥物分子為后續研究節省成本。
基于SPR親和力測定技術,卡梅德生物能夠為客戶提供準確、有效的售前技術支持,周期較短的各類精準、快速親和力測定服務,準確的親和力測定數據和高效的售后技術支持,為客戶的課題研究提供強有力的支持。
表面離子共振(SPR):
SPR親和力檢測是一種通過傳感器芯片跟蹤信號變化來檢測分子相互作用的方法。SPR信號通過分子間的結合和解離而產生的光折射率變化呈現,它指的是響應單位 (RU) 大約相當于1pg/mm2的蛋白質表面濃度。在兩個分子之間的相互作用過程中,隨時間繪制SPR信號會產生傳感圖,該圖可以實時可視(圖 1)。一般結合反應包括三個階段:結合、平衡和解離;將這些傳感圖數據與數學模型擬合,科學家們可以計算關聯 (Ka) 和解離 (Kd) 速率常數,并最終確定結合親和力(KD)。與基于平衡點測量抗體結合親和力的等溫量熱法 (ITC) 不同,SPR可以獲得完整的動力學參數來評估結合和解離的所有影響以及抗體親和力。
在抗體親和力測量中,待分析的抗體首先被固定在傳感器芯片表面的高親和力抗IgG 抗體捕獲。然后將一系列濃度的抗原依次注射到整個表面。根據傳感圖曲線,人們可以根據動力學參數對抗體進行排序,并選擇具有優質特性的單克隆抗體。與緊密結合抗體的發現相比,特定區域(表位)的鑒定在藥物發現中有前景,因為通過標準的蛋白工程方法可以使結合親和力成熟。因此,基于涉及兩種結合反應的二價分析物模型,我們能夠提供分析來鑒定與兩種不同抗原表位結合的抗體。首先將通用抗體(如兔抗小鼠免疫球蛋白)共價連接到芯片表面,然后一抗被先前連接的通用抗體捕獲。不飽和位點被封閉后,注射的抗原將與一抗結合,形成Ab-Ag復合物。隨后施用于評估結合親和力的第二單克隆抗體,如果第二抗體結合不同的單獨表位,將觀察到特有的傳感圖曲線。
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圖1卡梅德生物提供的表面離子共振法原理圖
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應用范圍:
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我們提供通過SPR分析研究的生物分子相互作用的服務。
通過SPR研究各種生物實體,包括小分子 (<100 Da) 、蛋白質、核酸、脂質、細菌、病毒和全細胞。大多數已發表的SPR研究涉及蛋白質-蛋白質相互作用,其中抗體-抗原相互作用代表了一個主要方向。我們提供高靈敏度的儀器和準確的實驗方案,幫助客戶進行小分子、脂質和核酸的研究。蛋白質與較大實體(如全細胞和一些細菌和病毒)的相互作用受到漸逝波指數衰減的限制。在實踐中,可以有效地研究這些大分子,但獲得的信息可能僅限于定性或半定量(例如,相對排序)數據。
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?檢測類型:
有幾種類型的 SPR親和力檢測是常用的,包括結合特異性、濃度分析、動力學和親和力分析以及熱力學。每種檢測類型都會生成有助于分析生物分子的獨特信息。
SPR親和力檢測也適用于定性研究以確認相互作用的特異性??梢员O測許多連續的結合事件,因為每個單獨的事件都會導致傳感器芯片表面的質量增加,并且結合過程的所有階段都受到監測。例子包括表位作圖、抗體同種型和免疫原性測量。
大多數用于定量蛋白質的化學和光譜方法 (1) 測量總蛋白質含量, (2) 不能區分活性分子和非活性分子,以及不能與未純化的樣品結合使用。由于SPR是一種非侵入性方法(沒有光穿透樣品),它可以測量來自復雜基質(例如食品、血清或血漿以及細胞提取物)的少量分析物分子。用于測量濃度的直接或間接(抑制或競爭)是可能的。SPR生物傳感器特別適用于通過實時測量結合相互作用來測量動力學結合和解離速率常數。
圖2 卡梅德生物SPR傳感器表面吸附牛血清蛋白
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SPR親和力測定特點:
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--性能穩定,對于親和力的檢測在特定的應用場景,如蛋白獲得特別珍貴時,檢測的親和力數據一般較高
--對于很多小分子的檢測,要求的buffer比較苛刻,芯片相對較貴
樣品要求:
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客戶提供 |
要求 |
客戶可提供抗體,蛋白,多肽,化合物小分子等樣品 |
* 緩沖液:PBS, HEPPS等不含有機試劑,不含Tris等帶有氨基基團的試劑,盡量不含甘油,咪唑,海藻糖或其他鹽類
* 蛋白:帶標簽>50μg,不帶標簽>100μg,濃度>0.1mg/ml,純度>90%,避免顆?;蛐鯛畛恋?/span>
* 抗體:>100μg,濃度>0.1mg/ml,純度>90%,避免顆?;蛐鯛畛恋?/span>
* 多肽:帶生物素標記>200μg,不帶生物素標記>2mg,濃度>0.1mg/ml,純度>90%,避免顆?;蛐鯛畛恋?/span> * 小分子(粉末或液體,液體可需溶于水或DMSO):>1 mg,濃度>1mg/ml,純度>90% |
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服務優勢:
--技術專家直接服務,滿足客戶需求
--高準確度分析儀器,經驗豐富的操作以及嚴格的質量管理,保證結果準確可靠
--檢測效率高,無需標記,可實現高通量檢測,檢測過程實時監控
--方法設計更加便捷,簡單靈活易操作
--儀器檢測靈敏度更高,樣品消耗量更低
--抗干擾能力強:檢測不受溫度、緩沖液折射率等外界環境影響
--應用范圍廣泛:可用于蛋白、核酸、多肽、納米材料等分子互作分析
--提供真正的一站式服務:提供從親和力測定服務,到分子互作研究的一體化解決方案
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如何訂購?
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