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        地址:天津市武清區國際企業社區A5號樓四層,301700

        郵箱:info@kmdbioscience.com

        人源Fab抗體文庫構建服務

        卡梅德生物(KMD Bioscience)多年來致力于抗體領域研究。獲得雜交瘤單克隆抗體序列信息是進行抗體重組改造,抗體藥物發現的基礎,而抗體的Fab片段則是抗體重組改造的主要區域。我們積累了豐富的抗體文庫構建經驗,能夠為客戶提供基于抗體噬菌體展示文庫技術的人源Fab抗體文庫構建服務。

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        抗體Fab簡介:

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        Fab片段是抗體結構中可以與抗原結合的區域,也叫做抗原結合片段,涉及到抗體-抗原結合的親和力,抗體特異性等特征??贵wFab片段含有1個可變區(V區)和1個恒定區(C1),V區含有3個互補決定結構域(CDR),涉及到獨特型抗體的產生,抗體的超頻突變,尤其是CDR3結構域是抗體工程改造的核心區域;C1區主要起結構支撐作用。Fab抗體可以通過酶解法進行制備。

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        抗體文庫制備服務人源Fab抗體庫構建服務:

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        構建Fab抗體文庫是獲得高質量,高親和力藥物抗體的有效途徑之一,高庫容量(109-1012)的噬菌體展示Fab抗體文庫提高了抗體工程改造速度,如重組人單克隆抗體,嵌合抗體的制備速度。

        ---Fab抗體庫設計理念

        噬菌體展示Fab抗體文庫的核心在于提高獨立噬菌體展示克隆的數量,在卡梅德生物的實驗室中,我們的科學家努力將抗體的可變區(VH和VL)基因,尤其是CDR區域(互補決定區)采用不同的策略和方式,如氨基酸突變,移碼讀框等形成數目較大的獨立克隆。此外我們設計了一套方案:在體外對人外周血單核細胞進行敏化處理后,通過流式分選技術分離出高親和力的單核細胞,進行EBV單克隆化處理,利用該方法能夠獲得高度一致性的單核細胞克隆,再進行文庫建設。

        ---噬菌體宿主體系選擇

        卡梅德生物擁有M13,T4和T7噬菌體展示系統,根據客戶的項目需求(展示的蛋白或抗體片段的大小等參數),我們會采用不同的噬菌體系列進行文庫構建。

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        項目流程:

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        步驟

        服務內容

        周期

        外周血單核細胞單克隆化

        * 獲取外周血單核細胞

        * 單核細胞敏化

        * EBV病毒單克隆化

        * 流式細胞分選后單克隆培養

        8-12周

        抗體cDNA制備

        (客戶可以提供細胞)

        * 總RNA提取

        * 高保真RT-PCR制備cDNA

        * 系統對照:Actin特異引物PCR擴增,以鑒定逆轉錄產品cDNA質量

        構建抗體庫

        * 引物設計與合成:抗體可變區兼并引物設計、合成

        * 以cDNA為模板,PCR擴增抗體重鏈和輕鏈可變區基因

        * scFv基因拼接

        * 噬粒構建與轉化:酶切、連接scFv和噬菌粒載體,電擊轉化TG1宿主菌,構建抗體庫

        * 鑒定:隨機挑選20-50個克隆,PCR鑒定陽性率,測序和分析抗體序列

        * 包裝,>1?1013噬菌體顆粒/ml

        交付

        * 構建報告,包括詳細建程序,代表性序列信息

        * 產品交付:細菌和噬菌體兩種形式抗體庫

        ?1.客戶提供人外周血淋巴細胞,淋巴結細胞或脾臟細胞(保存在RNA later等溶液中,避免RNA降解,藍冰運輸),從第二步開始制備Fab抗體文庫,只需8-9周即可完成。

        2.?采用TriZol溶液制備細胞裂解物,干冰運輸。?

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        技術流程:

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        服務優勢:

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        --免疫,合成抗體噬菌體文庫構建

        --周期短:預制抗體文庫篩選服務

        --嚴謹完整的QC標準

        --高庫容量:獨立克隆數107 - 1012

        --個性化的文庫淘篩策略

        --高親和力抗體制備:10-7-10-13

        --多種噬菌體展示系統:M13,T4,T7

        --完整的上下游服務:提供從抗體制備、抗體測序,抗體標記修飾,到抗體人源化等一站式技術服務,節約客戶寶貴時間和經費

        --服務可定制:根據客戶需求制備,為每一個客戶量身定制實驗方案,滿足每一位客戶的特殊需求

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        如何訂購?

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        如果您對我們的服務項目感興趣,請直接撥打熱線電話:+86-400-621-6806或發送郵件至info@kmdbioscience.com

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