卡梅德生物科技（天津）有限公司
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郵箱：info@kmdbioscience.com
卡梅德生物（KMD Bioscience）多年來致力于抗體領域研究。獲得雜交瘤單克隆抗體序列信息是進行抗體重組改造，抗體藥物發現的基礎，而抗體的Fab片段則是抗體重組改造的主要區域。我們積累了豐富的抗體文庫構建經驗，能夠為客戶提供基于抗體噬菌體展示文庫技術的人源Fab抗體文庫構建服務。
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抗體Fab簡介：
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Fab片段是抗體結構中可以與抗原結合的區域，也叫做抗原結合片段，涉及到抗體-抗原結合的親和力，抗體特異性等特征?？贵wFab片段含有1個可變區(V區)和1個恒定區（C1），V區含有3個互補決定結構域（CDR），涉及到獨特型抗體的產生，抗體的超頻突變，尤其是CDR3結構域是抗體工程改造的核心區域；C1區主要起結構支撐作用。Fab抗體可以通過酶解法進行制備。
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抗體文庫制備服務 – 人源Fab抗體庫構建服務：
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構建Fab抗體文庫是獲得高質量，高親和力藥物抗體的有效途徑之一，高庫容量（109-1012）的噬菌體展示Fab抗體文庫提高了抗體工程改造速度，如重組人單克隆抗體，嵌合抗體的制備速度。
---Fab抗體庫設計理念
噬菌體展示Fab抗體文庫的核心在于提高獨立噬菌體展示克隆的數量，在卡梅德生物的實驗室中，我們的科學家努力將抗體的可變區（VH和VL）基因，尤其是CDR區域（互補決定區）采用不同的策略和方式，如氨基酸突變，移碼讀框等形成數目較大的獨立克隆。此外我們設計了一套方案：在體外對人外周血單核細胞進行敏化處理后，通過流式分選技術分離出高親和力的單核細胞，進行EBV單克隆化處理，利用該方法能夠獲得高度一致性的單核細胞克隆，再進行文庫建設。
---噬菌體宿主體系選擇
卡梅德生物擁有M13，T4和T7噬菌體展示系統，根據客戶的項目需求（展示的蛋白或抗體片段的大小等參數），我們會采用不同的噬菌體系列進行文庫構建。
項目流程：
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步驟 |
服務內容 |
周期 |
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外周血單核細胞單克隆化 |
* 獲取外周血單核細胞
* 單核細胞敏化
* EBV病毒單克隆化
* 流式細胞分選后單克隆培養 |
8-12周 |
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抗體cDNA制備
（客戶可以提供細胞） |
* 總RNA提取
* 高保真RT-PCR制備cDNA
* 系統對照：Actin特異引物PCR擴增，以鑒定逆轉錄產品cDNA質量 |
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構建抗體庫 |
* 引物設計與合成：抗體可變區兼并引物設計、合成
* 以cDNA為模板，PCR擴增抗體重鏈和輕鏈可變區基因
* scFv基因拼接
* 噬粒構建與轉化：酶切、連接scFv和噬菌粒載體，電擊轉化TG1宿主菌，構建抗體庫
* 鑒定：隨機挑選20-50個克隆，PCR鑒定陽性率，測序和分析抗體序列
* 包裝，＞1?1013噬菌體顆粒/ml |
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交付 |
* 構建報告，包括詳細建程序，代表性序列信息 * 產品交付：細菌和噬菌體兩種形式抗體庫 |
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注?：1.客戶提供人外周血淋巴細胞，淋巴結細胞或脾臟細胞（保存在RNA later等溶液中，避免RNA降解，藍冰運輸），從第二步開始制備Fab抗體文庫，只需8-9周即可完成。
2.?采用TriZol溶液制備細胞裂解物，干冰運輸。?
技術流程：
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服務優勢：
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--免疫，合成抗體噬菌體文庫構建
--周期短：預制抗體文庫篩選服務
--嚴謹完整的QC標準
--高庫容量：獨立克隆數107 - 1012
--個性化的文庫淘篩策略
--高親和力抗體制備：10-7-10-13
--多種噬菌體展示系統：M13，T4，T7
--完整的上下游服務：提供從抗體制備、抗體測序，抗體標記修飾，到抗體人源化等一站式技術服務，節約客戶寶貴時間和經費
--服務可定制：根據客戶需求制備，為每一個客戶量身定制實驗方案，滿足每一位客戶的特殊需求
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如何訂購？
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