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        服務熱線
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        BLI親和力測定

        卡梅德生物(KMD ?Bioscience)在親和力測定方面擁有多年的項目經驗和心得,并且建立了完善的基于生物膜干涉技術的Octet平臺?;贠ctet 系統,卡梅德生物能夠為客戶提供精準、快速的BLI親和力測定服務。

        生物膜干涉技術(Biolayer Interferometry,BLI)是一種基于光學的對非標記的生物分子間的相互作用(全方位定量分析以及蛋白濃度測定等)進行實時監測的先進技術,該技術采用探針式生物傳感器對樣品直接進行檢測,通過檢測干涉光譜的位移變化來檢測傳感器表面相互作用的生物分子之間的結合和解離情況。與傳統的分子互作技術(免疫共沉淀、Pull Down、EMSA、ELISA等)相比,BLI親和力測定可以進行定量測定。Octet 系統包含多樣的傳感器類別、具有很高的靈活性和靈敏度,研究范圍較廣,包括抗原抗體親和力檢測,蛋白與小分子多肽親和力檢測,蛋白與小分子藥物的親和力檢測等。

        基于BLI親和力測定技術,卡梅德生物能夠為客戶提供準確、有效的售前技術支持,周期較短的各類精準、快速親和力測定,準確的親和力測定數據和高效的售后技術支持,為客戶的項目研究提供強有力的支持。

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        圖1 ForteBio Octet平臺圖

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        生物膜干涉技術(BLI):

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        生物膜干涉技術(Bio-Layer Interferometry, BLI)的原理是通過檢測干涉光譜的位移變化來檢測傳感器表面反應,當一束可見光從光譜儀射出后,在傳感器末端的光學膜層的兩個界面會形成兩束反射光譜,并形成一束干涉光譜。任何由于分子結合或解離而形成的膜層厚度和密度變化,能夠通過干涉光譜的位移值而體現,并通過這個位移值做出實時的反應監測圖譜。

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        圖2 BLI原理圖

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        應用范圍:

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        BLI技術應用范圍廣泛,我們提供通過BLI分析研究生物分子相互作用的服務。

        通過BLI研究各種生物實體,包括小分子?(<100 Da)、蛋白質、核酸、脂質、細菌、病毒和全細胞。已有很多研究應用BLI技術快速實現了親和力測定、蛋白定量分析及動力學分析等實驗。比如Lijun Zhou等人使用BLI技術研究了Lsm復合物與mRNA末端寡聚核糖核酸的結合能力與機制。LIU C X等人通過BLI技術,分別測定了不同時間點下過氧化物酶 I和過氧化物酶 II與生物素化腺苷的結合速率常數,表明半胱氨酸到絲氨酸的誘變可能影響了配體-蛋白質的相互作用。Kahsai等人通過BLI技術篩選了針對G蛋白偶聯受體的RNA適配體,并使用生化、藥理及生物物理實驗證明了適配體與靶標的親和結果,發現了RNA適配體作為GPCR調節劑的功能,顯著擴展了可用于研究G蛋白偶聯受體結構和功能調節的配體的多樣性。Wang W等人通過突變研究,多個層面對SUN-KASH復合物發揮功能的結構與分子機制進行了闡釋,BLI技術不僅可以檢測結合的強弱,還可以了解復合物的結合模式。Kawaharada等人通過BLI技術檢測結果表明了EPR3的胞外結構域可以特異識別單體EPS,BLI技術也可用于蛋白功能的研究。Landgraf等人借助BLI技術,使用SA傳感器研究多分子協同作用,對開發絲氨酸蛋白酶和假蛋白酶的選擇性變構激活劑具有廣泛的意義。

        我們提供高靈敏度的儀器和精確的實驗方案,可有效幫助客戶進行小分子、脂質和核酸的研究,得到定量數據。

        --檢測通量:96通道

        --分子檢測下限:150 Da

        --KD范圍:1 mM~10pM

        --樣品范圍:血清、細胞裂解液、上清液、發酵液、組織勻漿等粗樣品及純化樣品

        --Kon(結合速率):102~107M-1S-1

        --Koff(解離速率):10-6~10-1S-1

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        ?檢測類型:

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        有幾種類型的BLI動力學檢測是常用的,包括樣本之間是否存在特異性結合、結合親和力、結合/解離速率、篩選與排序、競爭實驗、抗原表位配對等動力學測定(圖3);抗體或重組蛋白定量、抗生素或毒素檢測、ELISA定量替代實驗等濃度測定(圖4)。每種檢測類型都會生成有助于分析生物分子的獨特信息。

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        圖3 BLI動力學檢測實時曲線

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        圖4 BLI濃度測定實時曲線

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        服務范圍:

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        卡梅德生物提供基于BLI親和力檢測技術的無標簽分子互作研究:包括蛋白質-蛋白質的親和力檢測;抗原-抗體親和力檢測;蛋白質與小分子藥物親和力檢測;蛋白質-DNA親和力檢測;抗體亞型分析;抗體配對;雜交瘤篩選等,以及根據客戶的需要,含受體的低分子量化合物和許多其他化合物的親和力檢測以及高通量親和力排序服務。

        根據不同的實驗目的、實驗樣本,我們可選擇匹配的傳感器進行實驗。我們擁有十余種傳感器,滿足豐富的樣本需求。

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        傳感器類型

        傳感器名稱

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        通用型

        * Streptavidin(SA)

        * Super Streptavidin(SSA)

        * High Precision Streptavidin(SAX)

        * Amine Reactive 2nd Generation(AR2G)

        * Aminopropylsilane(APS)

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        捕獲型

        * Anti-Penta-HIS(HIS)

        * Ni-NTA(HIS)

        * Anti-GST

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        抗體類

        * Anti-Human IgG Fc(AHQ)

        * Anti-Human IgG Fc(AHC)

        * Anti-Murine IgG Fv(AMQ)

        * Anti-Murine IgG Fc(AMC)

        * Anti Human IgG Fab(FAB2G)

        * Protein A

        * Protein G

        * Protein L

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        樣品要求:

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        客戶提供

        要求

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        客戶可提供抗體,蛋白,多肽,化合物小分子等樣品

        * 緩沖液:PBS, HEPPS等不含有機試劑,不含Tris等帶有氨基基團的試劑,盡量不含甘油,咪唑,海藻糖或其他鹽類

        * 蛋白:帶標簽>50μg,不帶標簽>100μg,濃度>0.1mg/ml,純度>90%,避免顆?;蛐鯛畛恋?/span>

        * 抗體:>100μg,濃度>0.1mg/ml,純度>90%,避免顆?;蛐鯛畛恋?/span>

        * 多肽:帶生物素標記>200μg,不帶生物素標記>2mg,濃度>0.1mg/ml,純度>90%,避免顆?;蛐鯛畛恋?/span>

        * 小分子(粉末或液體,液體可需溶于水或DMSO):>1 mg,濃度>1mg/ml,純度>90%

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        服務優勢:

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        --技術專家直接服務,滿足客戶需求

        --高準確度分析儀器,經驗豐富的操作以及嚴格的質量管理,保證結果準確可靠

        --檢測效率高,無需標記、實時監測、浸入即讀、可實現高通量檢測,檢測過程實時監控

        --方法設計更加便捷,簡單靈活易操作

        --儀器檢測靈敏度更高,樣品消耗量更低

        --傳感器種類豐富,可滿足各種配體固定需求

        --樣本容納性強:可適用于粗樣品:細胞上清、培養液等

        --抗干擾能力強:檢測不受溫度、緩沖液折射率等外界環境影響

        --應用范圍廣泛:可用于蛋白、核酸、多肽、納米材料等分子互作分析

        --提供真正的一站式服務:提供從親和力測定服務,到分子互作研究的一體化解決方案

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        如何訂購?

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        如果您對我們的服務項目感興趣,請直接撥打熱線電話:+86-400-621-6806或發送郵件至info@kmdbioscience.com

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        參考文獻:

        [1] ZHOU L J, ZHOU Y L, HANG J, et al. Crystal structure and biochemical analysis of the heptameric Lsm1-7 complex [J]. Cell Research, 2014, 24(4): 497-500.

        [2] LIU C X, YIN Q Q, ZHOU H C, et al. Adenanthin targets peroxiredoxin I and II to induce differentiation of leukemic cells [J]. Nature Chemical Biology, 2012, 8(5): 486-93.

        [3] KAHSAI A W, WISLER J W, LEE J, et al. Conformationally selective RNA aptamers allosterically modulate the beta(2)-adrenoceptor [J]. Nature Chemical Biology, 2016, 12(9): 709-+.

        [4] WANG W J, SHI Z B, JIAO S, et al. Structural insights into SUN-KASH complexes across the nuclear envelope [J]. Cell Research, 2012, 22(10): 1440-52.

        [5] KAWAHARADA Y, KELLY S, NIELSEN M W, et al. Receptor-mediated exopolysaccharide perception controls bacterial infection [J]. Nature, 2015, 523(7560): 308-+.

        [6] LANDGRAF K E, SANTELL L, BILLECI K L, et al. Allosteric Peptide Activators of Pro-Hepatocyte Growth Factor Stimulate Met Signaling [J]. Journal of Biological Chemistry, 2010, 285(51): 40362-72.

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