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?卡梅德生物（KMD Bioscience）致力于抗體抗原方面的研究，為客戶提供準確、快速的親和力測定服務。抗體及其片段是廣泛用于研究、診斷和治療的工具。 在表征抗體分子的不同參數中，對抗原-抗體的親和力測定的數據尤為重要。有幾種可用的方法來進行抗原抗體親和力檢測，但其中大多數要么依賴昂貴的設備（表面等離子體共振），要么不普遍適用（熒光修飾、透析）或需要修飾的抗原（放射性沉淀標記的抗原）。而競爭ELISA法測定親和力不是這種情況，它僅依賴于少量純化抗原和抗體，即可進行抗原抗體親和力檢測。

比如：在抗原抗體結合位點的篩選（抗體以及小分子多肽的篩選）實驗中，競爭ELISA法測定親和力可以快速、準確的進行抗原抗體、抗原與小分子多肽、蛋白質與抗體等親和力測定以及高通量的親和力數據排序，為客戶節省了大量的實驗成本，包括：人力、時間、費用等，并且為客戶后續的實驗項目提供了準確的數據支撐。

卡梅德生物（KMD?Bioscience）的科學家為客戶提供高性價比的快速、準確的，高通量的親和力測定

以及親和力排序服務。為客戶提供1-2周的快速檢測周期，同時卡梅德的技術專家能夠為客戶提供專業、有效的售前技術咨詢，為客戶的實驗項目提供有力的保障。

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競爭ELISA法：

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1．為了溶液中抗原抗體親和力檢測的親和常數的真實性，必須嚴格要求實驗條件以避免親和值偏差低估十倍。首先，使用單價抗體片段（Fab 或 scFv），可以調整二價片段的數學計算，但前提是抗原每個分子包含單個結合位點。然而，隨著抗體工程的出現，現在很容易在大腸桿菌中產生這樣的片段。其次，為了準確測量游離抗體濃度，ELISA不應顯著改變液相平衡。這需要進行初步實驗以確定正確的實驗條件。最后，建議使用曲線擬合程序來避免方程線性化引入的偏差，例如Scatchard 變換。

2．當抗體片段 (A) 與溶液中的抗原混合時，我們可以寫成

[A]=[A]_f+[A]_b

[B]=[B]_f+[B]_b

3．這里A、[A]_f、[A]_b分別是總的、游離的和結合的A濃度，[B]f和[B]b分別是游離和結合的“結合位點” 濃度。如果抗原是單體，[B] 等于抗原濃度。但如果抗原是多聚體，

[B]=n[Ag]=nx

4．其中 n 是每個抗原的位點數（例如，同源二聚體為2），x 是抗原濃度。由于每個結合位點綁定一個(A)，

B_b=A_b

5．因此質量定律為

K_d=[A]_f*[B]_f/[B]_b

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圖1 競爭ELISA原理示意圖

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圖2 競爭ELISA法快速測定配體受體

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實驗條件：

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--PBS10X：稱?。?.1 g Na2HPO4 (43 mM)，2 g KH2PO4 (15 mM)，NaCl 80 g (1.37 M)，2 g KCl (27 mM)，溶解到1L的蒸餾水中

--PBST：0.1% (v/v) Tween-20溶解到PBS中

--PBSM：3% (w/v) 脫脂奶粉溶解到PBS中

--碳酸鹽緩沖液（如果需要）：稱取50 mM Na₂CO₃，pH9.6，混合 16 ml 0.2 M Na₂CO₃、34 ml 0.2 M 碳酸氫鈉和150 ml H₂O

--PNPP：1 mg/ml 對硝基苯基磷酸二鈉鹽溶解在 100 mM Tris、100 mM NaCl、5 mM MgCl2 pH9.5中

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樣品要求：

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注意事項：

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在抗體濃度較低的情況下，我們建議使用競爭ELISA法來進行親和力測定。同時一般使用HRP偶聯抗體不能很好的檢測出信號，因此我們建議使用AP偶聯的鼠單克隆抗體?？返律镆恢敝铝τ谟H和力的研究，我們提供的親和力測定服務可以準確地測定抗體間的親和力。

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如何訂購？

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如果您對我們的服務項目感興趣，請直接撥打熱線電話：+86-400-621-6806或發送郵件至info@kmdbioscience.com?

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