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卡梅德生物(KMD?Bioscience)多年來致力于抗體領域研究。親和力是抗體藥物的一個關鍵參數,通常會影響抗體的功能和藥效。經過人源化改造后的抗體親和力一般會下降,因此,恢復人源化抗體的親和力或提高到更高的水平是必要的步驟,親和力成熟技術是用于提高抗體與抗原親和力的常用技術。
卡梅德生物能為客戶提供基于自有噬菌體抗體文庫技術制備的多物種抗體親和力成熟服務。我們擁有技能嫻熟的抗體團隊,在抗體親和力成熟方面積累了豐富的經驗,能夠將客戶提供單克隆抗體親和力提高2到3個數量級,達到10-9 M級別?;谑删w展示技術,卡梅德生物著力于提供一站式科研服務,包括噬菌體抗體庫構建和篩選、抗體人源化改造、人源Fab抗體文庫構建、人源scFV抗體庫構建、磷酸化抗體定制等多種技術服務,可為客戶定制合適的實驗方案。
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噬菌體抗體文庫技術 — 抗體親和力成熟服務:
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親和力成熟是指機體在遇到外源物質時,淋巴B 細胞發生抗體基因重排,同時伴隨超變區CDR的高頻突變以形成能分泌不同親和力抗體的淋巴B細胞。隨后低親和力的B 細胞死亡,高特異性與高親和力的B淋巴細胞存活并識別外源物種。
卡梅德生物利用噬菌體展示抗體文庫技術,結合錯誤傾向性PCR以及定點突變技術,能夠模擬這種生物體細胞超頻突變??返律锏募夹g優勢在于能夠進行體外快速突變,建立超過具有1010獨立克隆的抗體噬菌體展示文庫,從而在短時間內可以獲得抗原高特異性和高親和力的抗體。
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技術流程:
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常用的抗體體外親和力成熟技術:
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在體外抗體親和力成熟過程中,選擇突變區域以及如何引入突變是一個關鍵問題,目前的突變策略主要分為三大類,分別為:隨機突變、置換和定向突變、易錯PCR。
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特點 |
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易錯PCR |
* 是目前常用的抗體突變技術,可以在抗體基因的全長或部分區域隨機引入突變。在聚合酶對目的基因擴增時,通過應用錯配率高的聚合酶或調整反應條件等,以一定的頻率向目的基因中隨機引入突變,并通過多輪PCR反復進行隨機誘變,累計突變效應,最終獲得目的蛋白的隨機突變體 |
鏈置換 |
* 鏈置換是保留某個特定抗體的重鏈或輕鏈,另一條鏈與一個隨機化的互補鏈進行組合,經過噬菌體抗體庫篩選從中篩選更高活性的突變株 |
定點突變 |
* 體細胞高頻突變發生區域主要集中在與抗原直接接觸的CDR區。在抗體的親和力體外成熟過程中,CDR區是常選用的定點突變區域,對CDR進行定點突變時,可以對多個CDR進行平行突變或進行逐步優化 |
DNA改組 |
* DNA改組技術是對同源的抗體基因,采用脫氧核糖核酸酶I將其切割成不超過50bp的片段,再隨機組合后進行PCR擴增成完成的抗體基因的技術 |
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交付結果:
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交付內容 |
經親和力優化的抗體序列 |
高親和力的純化抗體 |
完善的實驗報告和數據:包括SDS-PAGE及親和力分析等結果 |
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服務優勢:
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--提供多種方法保證親和力成熟項目的成功率
--技術嫻熟的技術人員,擁有豐富的成功經驗
--專業的抗體數據庫分析系統
--成熟的隨機突變、定點突變技術
--搭建了快速、高通量的抗體表達與篩選技術平臺
--提高抗體親和力,優化與不同種屬的抗原的交叉結合能力
--完整的上下游服務:提供從抗體制備、抗體測序,抗體標記修飾,到抗體人源化等一站式技術服務,節約客戶寶貴時間和經費
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