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卡梅德生物的抗體開發平臺經過多年項目開發的積累,具有開發性能媲美于細胞信號轉導公司(CST)磷酸化的多克隆抗體和單克隆抗體。我們能夠為客戶提供一站式磷酸化抗體制備服務,包括磷酸化多肽設計、實驗方案設計及相關驗證服務,磷酸化與非磷酸化的抗原交叉反應,Western Blot 和免疫組化等,以滿足不同客戶的項目需求。
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蛋白磷酸化是細胞中重要的后翻譯修飾作用(PTM),主要涉及到蛋白生物活性水平的調節,包括活化或抑制蛋白質活性,從而進一步調節細胞信號轉導通路。在真核生物中,蛋白質磷酸化位點為絲氨酸,蘇氨酸和酪氨酸;在原核生物中磷酸化位點主要為組氨酸??返律锟蔀榭蛻籼峁┗谑删w展示技術的磷酸化單克隆重組抗體制備服務。?
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卡梅德生物為客戶提供的服務包括磷酸化位點的分析,磷酸化與非磷酸化多肽抗原設計與合成,噬菌體抗體文庫構建以及抗體純化與配對服務。
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步驟 |
服務內容 |
交付 |
抗原設計與合成 |
* 客戶提供抗原(多肽,蛋白),純度>90%
* 卡梅德設計與合成磷酸化與非磷酸化抗原(可選) |
(抗原由卡梅德制備)
* 磷酸化與非磷酸化抗原的MS和HPLC報告
* 5 mg磷酸化多肽,純度>90%
* 5 mg非磷酸化多肽,純度>90% |
抗原偶聯 |
*客戶提供偶聯抗原(KLH/OVA偶聯磷酸化多肽5mg,BSA偶聯磷酸化多肽5mg,BSA偶聯非磷酸化多肽5mg)
*卡梅德進行多肽偶聯(可選) |
* 5 mg?KLH/OVA磷酸化多肽,純度>90%
* 5 mg?BSA磷酸化多肽,純度>90%
* 5 mg?BSA偶聯非磷酸化多肽,純度>90% |
動物免疫 |
方案一:免疫5?只Balb/c?小鼠(采用小鼠免疫佐劑,20天即可快速產生高抗體滴度血清),ELISA檢測血清效價
方案二:免疫2-3?新西蘭大白兔(采用兔專用免疫佐劑,28天可產生高抗體滴度),ELISA檢測血清效價(其他動物可選) |
* 1-2ml免疫前血清
* ELISA血清效價驗證報告 ? |
抗體噬菌體展示文庫制備 |
* 收集免疫后的淋巴B細胞
* 提取mRNA,PCR克隆cDNA,噬菌體載體構建,轉化,擴增
* 磷酸化與非磷酸化抗原進行抗體文庫正篩和反篩
* 陽性克隆再進行擴增,穿梭質粒構建
* 小規模與大規模哺乳體系表達(293,CHO),抗體純化與驗證 |
* 重組表達質粒
* 2-5 mg?純化重組抗體
* ELISA報告,含效價,交叉實驗報告
* 抗體識別磷酸化抗原效價不低于104且不與非磷酸化抗原反應(ELISA)
* Western Blot驗證報告(可選)
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--高特異性:所制備重組單抗只識別特定磷酸化位點,與非磷酸化抗原無反應
--全程可追溯的文件支撐體系
--高抗體效價:保證型抗體ELISA效價可達104~105
--多種制備規模:5,15,80L 發酵罐級別可選
--自主優化的特異性抗體純化技術,得到靈敏度很高的磷酸化抗體
--提供從抗原設計到抗體制備的一站式服務,快捷便利
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