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卡梅德生物(KMD Bioscience)多年致力于重組蛋白表達與制備研究。我們的科學家擁有豐富的酵母(Yeast)蛋白重組表達、發酵和純化經驗,能夠快速為不同客戶定制蛋白酵母表達策略。 蛋白酵母表達系統兼具部分原核蛋白表達特征(培養條件簡單、生長速度快、表達水平高、操作簡便)和部分真核蛋白表達特征(蛋白翻譯后能進行正確加工、修飾,合理的空間折疊)。重組蛋白酵母表達系統的優勢主要表現在以下幾個方面:重組蛋白既可以分泌形式又可以非分泌形式在酵母系統中表達,且能高水平表達,達到5g/L;外源蛋白基因可以以整合的方式插入到酵母染色體上,隨染色體復制而不會丟失;酵母具有真核生物的亞細胞結構,具有糖基化、脂肪?;?、蛋白磷酸化等翻譯后修飾加工功能,適合活性蛋白表達;容易實現超高密度發酵,卡梅德生物能同時為客戶提供多種規格的蛋白酵母發酵規模,如500L發酵罐,配合我們的蛋白純化平臺,能夠在較短周期內獲得高質量的重組蛋白產品。 |
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蛋白酵母分泌表達步驟與周期?:
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步驟 |
服務內容 |
周期 |
酵母表達載體亞克隆 |
* 密碼子優化,基因合成(或客戶提供質粒模板:目的基因擴增)
* 將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上,可提供表達載體,如pPICZaA?、pGAPZaA、pPIC9K
* 拼接序列驗證:測序
* 交付:正確構建的重組表達質粒,含重組質粒的DH5α菌株及測序原始報告 |
1-2周 |
酵母表達菌株轉化 |
* 可提供表達菌株:X33,GS115,釀酒酵母等
* 擴增培養5-10個陽性克隆并進行重組蛋白誘導表達 * SDS-PAGE交付:陽性克隆菌株及表達篩選結果報告 |
2周 |
酵母表達菌株篩選 |
* 檢測重組蛋白表達情況(適用于多拷貝數和高表達菌株) * 交付:陽性克隆菌株及表達篩選結果報告 |
2周 |
酵母表達菌株表達優化 |
* 對挑選出來的單克隆菌株,優化培養及誘導條件(培養基,菌體密度,甲醇濃度,誘導時間等),提高目標蛋白的表達量 |
2周 |
小規模蛋白表達及純化 |
* 1L發酵液通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白 * SDS-PAGE交付:重組蛋白0.02-3mg及純化報告??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒═ag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,純度>85% |
2-3周 |
大規模蛋白表達及純化 |
* 10L,30L,80L,130L,500L發酵規模 |
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增值服務 |
* 通過HPLC,質譜等方法詳細檢測目標蛋白的質量
* 蛋白質N端測序:PPSQ31(Edman降解法測序儀) |
1-2周 |
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服務優勢:
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--密碼子優化:包含稀有密碼子分析,蛋白親水性分析和跨膜結構域的預測分析
--分泌蛋白表達,接近天然構象的重組蛋白
--多種規模蛋白發酵模式:小規模(500ml、10L)和大規模(80L、130L、250L和500L發酵罐)
--高純度毫克級,克級重組蛋白;穩定的批間一致性
--低內毒素:LAL檢測法<0.1EU/ug
--完整的GMP文件支撐體系,保證實驗信息可追溯
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