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卡梅德生物(KMD Bioscience)多年致力于重組蛋白表達與制備研究,建立了完善的哺乳表達體系,包括但不限于FreeStyle 293-F cell line?(Thermo Fisher)和Expi CHO-S (Thermo Fisher)等細胞系,配合卡梅德設計的高表達載體(含有全長的CMV啟動子以及優化后的分泌信號肽序列),能夠為客戶提供更高表達水平的重組蛋白哺乳動物細胞表達與制備。我們的科學家擁有豐富的蛋白哺乳動物重組表達、發酵和純化經驗,能夠根據不同客戶的需求高效的制定一對一的蛋白哺乳細胞表達策略。
哺乳動物蛋白表達系統適用于科學家對天然構象蛋白的體外重組表達需求,如糖基化修飾,磷酸化修飾等;利用哺乳動物蛋白表達系統,經過高密度發酵技術培養,卡梅德生物的科學家可以做到高達6.3g/L表達水平的重組抗體發酵,適合于重組單抗藥物的高水平表達發酵。我們的細胞發酵培養人員均經過嚴格的GMP體系培訓和質量控制體系培訓,可為客戶提供可追溯的蛋白表達與制備文件記錄。 卡梅德生物可為客戶提供嚴格按照GMP,包括細胞種子庫來源文件記錄體系、細胞種子批檢定,動物源成分的質控,標準化細胞培養與轉化操作流程,全套GE提供的純化填料和設備等準則進行生產的重組蛋白。我們的規?;l酵,除了使用發酵罐外,對于3-10L的貼壁哺乳動物細胞發酵規模,我們可以直接利用一次性細胞發酵工廠進行細胞發酵,蛋白表達制備(需要客戶提供慢病毒或腺病毒等),該技術平臺發酵與轉化一次性完成,周期大大縮短。 |
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服務流程圖:
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服務內容與步驟:
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步驟 |
具體服務內容 |
周期 |
基因克隆及載體構建 |
* 擴增/鑒定基因片段或合成目的基因,插入哺乳動物細胞表達質粒
* PCR及測序檢測確定亞克隆基因 * 交付:測序數據,實驗方案,質粒1支(4-5ug),克隆菌株1支(1ml) |
2-3周 |
瞬時蛋白表達 |
* 重組質粒轉染細胞(293F, CHO) :瞬時表達
* SDS-PAGE和WB檢測 * 交付:表達結果和實驗報告,0.02-2 mg蛋白,純度>85%(SDS-PAGE) |
3–4周 |
穩定表達(可選) |
* 重組蛋白CHO或293F穩定表達細胞系構建和篩選 * 交付:穩定細胞系,構建報告;邊際產物,3個克隆,每個克隆50ml發酵產物 |
12–14周 |
小規模蛋白表達 |
* 少量表達及表達條件優化:1L的小規模蛋白表達 * 交付:優化報告,培養條件和全部重組蛋白(1-50mg) |
3–4周 |
大規模蛋白制備及純化 |
* 30L,80L,130L和250L發酵罐,以及多種規格細胞工廠(40層*N)
* 通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白 * 交付:重組蛋白及純化報告??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒═ag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白 |
5–8周 |
特殊蛋白表達 |
* 客戶提供指定細胞系,卡梅德生物復蘇與放大培養 * 定制化微載體懸浮培養技術,適用于貼壁細胞的高密度細胞發酵培養與蛋白表達(細胞數:107/ml)
* 細胞工廠化培養 |
協商 |
服務優勢:
--密碼子優化:包含稀有密碼子分析,蛋白親水性分析和跨膜結構域的預測分析
--多種融合標簽載體和宿主,以保證高可溶蛋白表達和高蛋白活性
--高活性表達:實現復雜的糖基化修飾和磷酸化修飾,具有完整的空間結構特征
--多重表達模式:穩定表達和瞬時表達
--低內毒素水平:LAL檢測法<0.1EU/ug
--多種規模蛋白發酵模式:小規模(500ml,2.5L,10L)、大規模(30L,80L,130L和250L發酵罐)
--完整的GMP文件支撐體系,保證您的產品所有材料、試劑和制備信息可追溯
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