卡梅德生物科技（天津）有限公司
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?卡梅德生物（KMD?Bioscience）多年致力于重組蛋白表達與抗體制備研究。我們的科學家擁有豐富的哺乳動物蛋白重組表達、發酵和純化經驗，能夠快速為不同客戶制定定制化的蛋白哺乳細胞表達方案。
卡梅德生物的哺乳動物重組蛋白表達可依托中國倉鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Ovarian Cells ，CHO) ，CHO細胞目前主要用于研究的有三種，分別是DUXB11 ， DG44 ，CHO-K1 。其中DUXB11與DG44屬于DHFR缺陷型， CHOK1為野生型。 CHO-S 為CHO-K1馴化后的懸浮細胞。使用 CHO 細胞進行蛋白表達時，最常使用兩種基因選擇系統：DHFR/MTX 和 GS/MSX。在卡梅德生物提供的蛋白表達哺乳動物系統中，CHO 細胞表達系統參與了超過 70% 的重組生物制藥蛋白質的研究。?CHO-GS 細胞系是世界范圍內用于治療性抗體蛋白表達的流行的表達系統。
卡梅德生物實驗室提供的基于CHO 細胞重組蛋白表達系統主要使用無血清 CHO 培養基。?
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CHO-K1細胞系：
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親代 CHO 細胞系的亞克隆，來自成年中國倉鼠的卵巢。由于缺乏脯氨酸合成基因，細胞需要脯氨酸，生物合成鏈中的障礙在于將谷氨酸轉化為谷氨酰胺γ絲醛的步驟。它們會因霍亂毒素而發生形態變化。
應用：營養和基因表達研究倉鼠的 CHO-K1 細胞系已用于通過慶大霉素保護試驗研究質粒 pCM01 誘導對細菌與 CHO-K1 細胞結合的影響。它還可以在有或沒有乳酸的情況下培養，以測量細胞增殖的時間序列。
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CHO表達的優勢：
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--CHO 細胞在復雜蛋白質的蛋白質折疊方面表現出色，具有準確的轉錄后修飾功能，表達的蛋白在分子結構、理化特性和生物學功能方面比較接近于天然蛋白分子
--CHO 細胞可以在無血清細胞培養基中生長良好，消除了血清作為傳染源的潛在來源，提供了高的安全性
--既可貼壁生長，又可以懸浮培養，且有較高的耐受剪切力和滲透壓能力
--具有重組基因的高效擴增和表達能力，外源蛋白的整合穩定
--CHO 細胞的蛋白質產量很高——通?？梢赃_到2 – 6 g/L
--無血清培養基中的 CHO 細胞可輕松進行下游加工
--CHO 細胞可以瞬時或穩定轉染以表達蛋白質
--在單克隆抗體的情況下，中國倉鼠卵巢 (CHO) 和 NS0 (小鼠骨髓瘤) 細胞是常用的細胞系
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GS系統工作原理：
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圖1顯示了 GS 酶如何催化谷氨酸和氨生成谷氨酰胺，從而使細胞能夠復制。
當 CHO 細胞中的蛋白質表達系統有 GS 缺失時，研究人員用重組 DNA轉染CHO 細胞，該 DNA 由與 GS 基因密切相關的目的基因組成。甲硫氨酸亞砜胺 (MSX) 選擇系統用于選擇產生目標蛋白質的 CHO 細胞。?MSX 是一種類似于谷氨酸的藥物，可與 GS 結合，從而抑制谷氨酰胺的產生，而谷氨酰胺是細胞生長所必需的。在基因擴增過程中，CHO 細胞在高水平的 MSX 中培養。選擇具有目標基因的 GS 基因拷貝數增加的 CHO 細胞。GS 水平不足的 CHO 細胞會死亡。一旦選定，來自 CHO GS 陰性宿主的轉染細胞系不需要培養基中的 MSX。
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圖1 ?GS 酶催化谷氨酸和氨生成谷氨酰胺
卡梅德生物根據客戶不同表達系統的選擇，為客戶提供需要插入配套的穩轉細胞系構建的表達載體，也為客戶提供表達載體定制的服務。
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表達系統的選擇：
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DHFR 系統用于 CHO 細胞，其中突變型 CHO?dhfr細胞系用含有靶基因和dhfr的載體轉染標記基因。選擇發生在不含次黃嘌呤、甘氨酸和胸苷的培養基中。同時，由于 MTX 能夠抑制 DHFR 酶，因此逐漸增加甲氨蝶呤 (MTX) 濃度以放大蛋白質產物的表達。GS 系統已用于 NS0 和 CHO細胞系，其中細胞用除 GS 基因外還含有目的基因的載體轉染。擁有GS基因的細胞可以合成自己的細胞內谷氨酰胺；因此，這些細胞可以在添加谷氨酸和天冬酰胺提供的氨基團的無谷氨酰胺培養基中培養。
與 DHFR 系統相比，GS 選擇系統的一個優點是細胞培養物產生的氨較少，這會對重組蛋白的糖基化產生負面影響；此外，GS 系統通常提供較短的選擇周期，因為該系統需要較低的基因拷貝數來實現類似的擴增轉基因表達水平。
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GS-CHO系統的表達載體：
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pKMD-CHO表達載體 |
p-CHO1.0表達載體 |
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客戶提供：
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項目 |
客戶提供 |
交付內容 |
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CHO哺乳表達細胞系構建 |
目標序列 |
* 克隆表達載體
* 穩定表達的單克?。靠蛇_7g/L）
* 蛋白（具體成品蛋白量根據小試中表達水平確定）
* 實驗報告 |
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服務優勢：
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--密碼子優化：包含稀有密碼子分析，蛋白親水性分析和跨膜結構域的預測分析
--多種融合標簽載體和宿主，以保證高可溶蛋白表達和高蛋白活性
--高活性表達：實現復雜的糖基化修飾和磷酸化修飾，具有完整的空間結構特征
--多重表達模式：穩定表達和瞬時表達
--低內毒素水平：LAL檢測法<0.1EU/ug
--完整的GMP文件支撐體系，保證您的產品所有材料、試劑和制備信息可追溯
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如何訂購？
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